J Ethnopharmacol：黄芪-当归药对通过AMPK/mTOR信号通路促进大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注后的自噬活性减轻焦亡

背景：脑缺血再灌注（I/R）损伤是缺血性脑卒中常见的并发症，其中自噬和焦亡起关键作用。黄芪-当归(HQDG)是临床治疗缺血性脑卒中常用的中药对。

研究目的：探讨HQDG通过AMPK/mTOR信号通路调控脑I/R损伤过程中自噬与焦亡的相互作用。

方法：采用Longa缝合法建立SD大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注（MCAO/R）模型。采用液相色谱-四极轨道阱高分辨质谱法（LC/MS）检测中药成分。用神经功能评分评价神经功能缺损。采用激光散斑血流显像仪检测脑血流变化。2,3,5-氯三苯四唑（TTC）染色观察脑梗死体积。采用埃文斯蓝法测定血脑屏障通透性。

透射电镜观察脑组织的神经血管单位和自噬体。采用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）dUTP镍端标记(TUNEL)/Caspase-1染色检测神经元焦亡。Western blot检测细胞自噬相关蛋白、焦亡相关蛋白、AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达。

结果：脑I/R损伤后，自噬和焦亡表现为自噬体和焦亡细胞数量增加，Beclin 1、LC3-II/LC3-I、NLRP3、cleaved Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达上调，P62蛋白表达下调。HQDG明显改善神经功能，减少脑梗死体积，增加脑血流量，改善血脑屏障通透性和神经血管单位功能。

HQDG进一步激活细胞自噬，显著抑制细胞焦亡，促进细胞自噬体数量增加，Beclin 1、LC3-II/LC3-I蛋白表达增强，P62、NLRP3、cleaved Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达降低，焦亡细胞数量下调。另一方面，给药3-甲基腺嘌呤（3-MA）抑制自噬后，HQDG的上述作用被显著抑制。此外，HQDG促进AMPK磷酸化，减弱mTOR磷酸化。然而，在给药AMPK抑制剂化合物C后，HQDG导致Beclin 1和LC3-II/LC3-I升高，P62和NLRP3降低，Caspase-1蛋白表达断裂，脑血流量减少。

结论：HQDG通过AMPK/mTOR信号通路促进大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注后的自噬，减轻了大鼠的焦亡，显示了其治疗人脑I/R损伤的潜力。

原始出处：

Liu L, Wang R, Gao W, et al. Drug pairs of Huangqi and Danggui alleviates pyroptosis by promoting autophagy activity via AMPK/mTOR signaling pathway in middle-cerebral artery occlusion/reperfusion in rats. J Ethnopharmacol. Published online October 23, 2024. doi:10.1016/j.jep.2024.118982